Examinando por Materia "Proteínas recombinantes"

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    PublicaciónAcceso abierto
    Comparison of seven diagnostic tests to detect Trypanosoma cruzi infection in patients in chronic phase of Chagas disease.
    (2015-02-10) Duarte, Luisa Fernanda; Flórez, Oscar; Rincón, Giovanna; González, Clara Isabel
    Objective: To compare the diagnostic performance of seven methods to determine Trypanosoma cruzi infection in patients with chronic Chagas disease. Methods: Analytical study, using the case-control design, which included 205 people (patients with Chagasic cardiomyopathy, n= 100; control group, n= 105). Three enzyme linked immunosorbent assays, one indirect hemagglutination assay and one immunochromatographic test were assessed. Additionally, DNA amplification was performed via the PCR method using kinetoplast and nuclear DNA as target sequences. For the comparative analysis of diagnostic tests, the parameters used were sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, Receiver Operator Characteristic (ROC), positive and negative likelihood ratio, as well as κ quality analysis. Results: The commercial Bioelisa Chagas test showed the highest sensitivity (98%), specificity (100%), and positive and negative predictive values; additionally it had the highest discriminatory power. Otherwise, the amplification of T. cruzi DNA in blood samples showed low values of sensitivity (kinetoplast DNA= 51%, nuclear DNA= 22%), but high values of specificity (100%), and moderate to low discriminatory ability. Conclusion: The comparative analysis among the different methods suggests that the diagnostic strategy of T. cruzi infection in patients with chronic Chagas disease can be performed using ELISA assays based on recombinant proteins and/or synthetic peptides, which show higher diagnosis performance and can confirm and exclude the diagnosis of T. cruzi infection. The molecular methods show poor performance when used in the diagnosis of patients with chronic Chagas disease.. Objetivo: Comparar la capacidad diagnóstica de siete métodos para determinar infección por Trypanosoma cruzi, en pacientes con enfermedad de Chagas crónica. Métodos: Estudio analítico de casos y controles, que incluyó 205 personas (pacientes con miocardiopatía chagásica, n= 100; grupo control, n= 105). Se evaluaron tres inmunoensayos enzimáticos, una hemaglutinación indirecta y una inmunocromatografia. Adicionalmente, se realizó amplificación de ADN de T. cruzi por reacción en cadena de la polimerasa utilizando como secuencias diana ADN de kinetoplasto y nuclear. Para el análisis comparativo de las pruebas diagnósticas, los parámetros utilizados fueron sensibilidad, especificidad, valores predictivo positivo y negativo, análisis ROC, razón de verosimilitud positiva y negativa, así como análisis de calidad κ. Resultados: La prueba Bioelisa para Chagas mostró la mayor sensibilidad (98%), especificidad (100%) y valores predictivos positivo y negativo; además ésta tuvo el mayor poder discriminatorio. En contraste, los ensayos de amplificación de ADN de T. cruzi mostraron baja sensibilidad (ADN de kinetoplasto= 51%, ADN nuclear= 22%), alta especificidad (100%) y de moderada a baja capacidad discriminatoria. Conclusión: El análisis comparativo entre los métodos sugiere utilizar como estrategia diagnóstica en pacientes crónicos con enfermedad de Chagas, los ensayos de ELISA con proteínas recombinantes y/o péptidos sintéticos por mostrar un rendimiento diagnóstico superior y tener la capacidad de confirmar y descartar el diagnóstico de infección por T. cruzi. Los métodos moleculares muestran pobre rendimiento para ser utilizados en el diagnóstico de pacientes en fase crónica con enfermedad de Chagas.
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    PublicaciónAcceso abierto
    Leishmania (Viannia) panamensis expresses a nuclease with molecular and biochemical features similar to the Endonuclease G of higher eukaryotes.
    (2011-11-04) Toro Londoño, Miguel A.; Patiño, Edwin Bairon; Robledo, Sara María; Jiménez Ruiz, Antonio; Alzate, Juan Fernando
    Objective: To characterize the molecular and biochemical features of the Endonuclease G of Leishmania (Viannia) panamensis. Methods: The gene of the putative L. (V.) panamensis Endonuclease G was amplified, cloned, and sequenced. The recombinant protein was produced in a heterologous expression system and biochemical assays were run to determine its ion, temperature, and pH preferences. Results: The L. (V.) panamensis rENDOG has biochemical features similar to those found in other trypanosomatids and higher eukaryotes. In addition, phylogenetic analysis revealed a possible evolutionary relationship with metazoan ENDOG. Conclusions: L. (V.) panamensis has a gene that codifies an ENDOG homologous to those of higher organisms. This enzyme can be produced in Escherichia coli and is able to degrade covalently closed circular double-stranded DNA. It has a magnesium preference, can be inhibited by potassium, and is able to function within a wide temperature and pH range. Objetivo: Caracterizar molecular y bioquímicamente la Endonucleasa G (EndoG) de Leishmania (Viannia) panamensis. Métodos: El gen de la putativa Endonucleasa G de L. (V.) panamensis fue amplificado, clonado y secuenciado. La proteína recombinante se produjo en un sistema de expresión heterólogo y la proteína activa se sometió a pruebas bioquímicas para determinar la preferencia de iones, temperatura y pH. Resultados: La rEndoG de L. (V.) panamensis muestra características bioquímicas similares a aquellas descritas en otros trypanosomatidos y en eucariotas superiores. Además, los análisis filogenéticos muestran una posible relación evolutiva con la Endonucleasa G de metazoos. Conclusiones: Leishmania (V.) panamensis posee un gen que codifica para una endonucleasa homóloga a la EndoG de otros organismos superiores, que se puede producir de forma recombinante en Escherichia coli y que es capaz de degradar ADN circular cerrado de doble cadena. Tiene una preferencia por los iones magnesio y manganeso para usarlos como cofactor y es inhibida por el potasio. Además, funciona en un amplio rango de pH y temperatura.
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    PublicaciónAcceso abierto
    Malaria vaccines : high-throughput tools for antigen discovery with development potential.
    (2013-07-09) Céspedes, Nora; Vallejo, Andrés; Arévalo Herrera, Myriam; Herrera, Sócrates
    Malaria is a disease induced by parasites of the Plasmodium genus, which are transmitted by Anopheles mosquitoes and represents a great socio-economic burden worldwide. Plasmodium vivax is the second species of malaria worldwide, but it is the most prevalent in Latin America and other regions of the planet. It is currently considered that vaccines represent a cost-effective strategy for controlling transmissible diseases and could complement other malaria control measures; however, the chemical and immunological complexity of the parasite has hindered development of effective vaccines. Recent availability of several genomes of Plasmodium species, as well as bioinformatics tools are allowing the selection of large numbers of proteins and analysis of their immune potential. Herein, we review recently developed strategies for discovery of novel antigens with potential for malaria vaccine development. Resumen La malaria es una de las enfermedades transmisibles de mayor impacto socio-económico a escala mundial, y es inducida por parásitos del género Plasmodium transmitidos por mosquitos del genero Anopheles. El Plasmodium vivax ocupa el segundo lugar en prevalencia mundial, pero es la especie más frecuente en América Latina y otras regiones del planeta. Se considera que las vacunas representan una estrategia costo-efectiva para el control de enfermedades transmisibles y que podrían complementar las demás medidas de control de la malaria; sin embargo, la complejidad química e inmunológica del parasito han dificultado el desarrollo de vacunas efectivas. La reciente accesibilidad a los genomas de varias especies de Plasmodium, y el desarrollo de herramientas bioinformáticas están permitiendo la selección de numerosas proteínas y el análisis de su potencial inmunológico. Aquí revisamos las estrategias recientes para el descubrimiento de nuevos antígenos para el desarrollo vacunas contra la malaria.