Resumen en español

Introducción: Las técnicas de Inmunohistoquímica son hoy en día una de las herramientas más importantes en el diagnostico histopatológico, sin embargo la manipulación de las muestras y el método de procesamiento puede llevar a cambios en la estructura de las proteínas que llevan a enmascaramiento de antígenos, dificultando la identificación con anticuerpos. Entre los diferentes métodos de recuperación antigénico propuestos en la literatura, el de calor húmedo con Vaporera ha tenido gran aceptación por su simplicidad, control y bajo costo. Objetivo: En el presente trabajo se propone un protocolo de recuperación antigénica con calor húmedo, en muestras de tejido óseo que ya habían sido previamente fijadas en formaldehido, decalcificadas con etilendiaminotetraacético (EDTA), e incluidas en parafina. Materiales y método: Se utilizaron muestras de tejido óseo de cerdo que habían sido preparadas con técnicas convencionales, pertenecientes a la colección del laboratorio de patología de la Universidad del Valle. Se realizó refijacion en glutaraldehido y se empleó una vaporera para intensificar la exposición de antígenos. Se utilizó como anticuerpo primario el anti TRAP de DEKO®, monoclonal, originado en ratón, y como secundario el KIT UltraVision LP Large Volume Detection System HRP Polymer ®. Resultados: En todas las muestras expuestas al anticuerpo primario en diluciones 1:20 y 1:40 se observó inmunotinción de células mononucleares compatibles con pre osteoclastos, y células gigantes multinucleadas compatibles con osteoclastos. Conclusiones: La recuperación antigénica con calor húmedo es un método confiable en la recuperación antigénica de muestras óseas fijadas con formaldehido. SUMMARY Introduction: Nowadays, Immunohistochemistry are one of the most important techniques in the histopathological diagnosis. Despite of handling and processing cautions, both of them may generate changes in the protein structure, masking antigens, preventing antibody identification. Among different antigen retrieval methods proposed by the literature, the humid heat with Steamer has been widely accepted for its simplicity, control and low cost. Objective: In this paper a protocol for humid heat antigen retrieval use in bone tissue samples that had been previously fixed in formaldehyde, decalcified with ethylenediaminetetraacetic (EDTA ), and embedded in paraffin is proposed. Materials and methods: Samples of pig’s bone that had been prepared with conventional techniques, from the collection of the pathology laboratory of the University of Valle were used. New fixed process was performed in glutaraldehyde and a steamer was used to enhance antigen exposure. The anti-TRAP DEKOs ®, mouse monoclonal antibody was used as primary antibody, and the KIT UltraVision LP Large Volume Detection System HRP Polymer ® was used as a secondary antibody. Results: In all samples exposed to primary antibody in 1:20 and 1:40 dilutions immunostaining mononuclear cells compatible with preosteoclasts were observed; immunostaining multinucleated giant cells consistent with osteoclasts were described. Conclusions: Humid heat for antigenic recovery is a reliable method for the recovery of bone antigen samples fixed with formaldehyde.